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O-Glycosidase

Rhinogen®  O-Glycosidase是一种高度纯化和非常稳定的糖苷内切酶,具有稳定性高、比活性高等特点。适用于蛋白质组学及糖生物学研究中糖蛋白上O-连寡糖链的有效释放。

高纯度:没有污染蛋白酶/其它糖苷酶,纯度≥95%;

高稳定性:每批Rhinogen® O-Glycosidase产品都经过严格的质量控制,以实现产品批间稳定性;

高比活性:有效和完全的释放O-连聚糖。



  1. 货号
  2. 规格
  3. 价格
QPF-004-A
1,200,000U/30μl
询价
QPF-004-B
5×1,200,000U/30μl
询价

产品概述

背景:

       来源于Streptococcus Pneumoniae(或Enterococcus Faecalis)的O-糖苷酶(O-Glycosidase,EC 3.2.1.97)是一类重要的糖基化研究的工具酶。Rhinogen®  O-Glycosidase是将来源于Enterococcus FaecalisO-Glycosidase基因重组并表达于大肠杆菌BL21中的重组酶,能够将糖蛋白中Ser或Thr残基的羟基连接的Core 1(Gal-β(1-3)-GalNAc-)及Core 3(GlcNAc-β(1-3)-GalNAc-)O-连双糖释放下来,如图1。该酶对α-GalNAc结合是特异性的,但对于Ser或Thr残基没有明显的偏好,同时糖蛋白的变性与否也不显着影响O-去糖基化的效率。核心结构的任何修饰都可以阻断O-Glycosidase的作用,最常见的修饰是核心结构的单、二或三唾液酸化。除此以外,核心结构还可能被岩藻糖,N-乙酰葡糖胺或N-乙酰半乳糖胺残基进一步取代修饰,核心结构以外的单糖必须通过一系列外切糖苷酶依次切割,直到仅保留Core 1或Core 3二糖核心。然后O-Glycosidase才能够完整的从Ser或Thr残基上释放二糖核心,如图2。通常O-Glycosidase的使用都需要配合唾液酸酶。




 图1 Rhinogen® O-Glycosidase作用O-连二糖核心的类型



图2  复杂O-聚糖结构的糖链释放

 

产品包装:

       Rhinogen® O-Glycosidase包装规格如下:

目录号

规格

浓度

QPF-004-A

1,200,000U/30μl

40,000,000U/ml

QPF-004-B

5×1,200,000U/30μl

40,000,000U/ml

储存体系:

       QPF-004储存在缓冲液中,以液体的形式提供。缓冲液的组成为:50 mM NaCl,20 mM Tris-HCl,1 mM EDTA,pH 7.5。

配套试剂:

       Rhinogen® O-Glycosidase 配套提供的试剂如下:

试剂 
 成分
10×Denaturing缓冲液
5%SDS, 0.4M DTT
10×Glyco缓冲液2
0.5M Sodium Phosphate(pH7.5 at 25°C)
10%NP-40溶液
10%NP-40

产品来源:

       Rhinogen® O-Glycosidase是一种将来源于Enterococcus FaecalisO-Glycosidase基因重组并表达于大肠杆菌BL21中的重组酶,分子量大小约为147kDa。

产品质量:

       SDS-PAGE分析,纯度≥95%;没有检测到污染的外切糖苷酶、糖苷内切酶及蛋白酶活性。 

产品特性:

       最适反应pH为7.5;热失活条件:65°C处理10 min。 

酶活定义:

       1个酶活力单位定义:在100 μl反应体系中,37°C,pH7.5条件下,1小时内从5mg唾液酸酶消化后的非变性fetuin 上催化释放0.68nmol O-连二糖所需要的酶量。

储存条件:

       -20℃条件下,避免反复冻融。 

应   用:

       1.O-聚糖结构分析;

       2.糖蛋白生物合成分析;

       3.涉及O-聚糖的病理生理学研究;

       4.治疗性重组蛋白的表征及质量控制;

       5.癌症研究和异常O-糖基化的鉴定及体外诊断。


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常见问题

使用O-Glycosidase处理糖蛋白后,没有看到糖链的去除,可能的原因?

蛋白质的糖基化修饰有N-糖基化及O-糖基化修饰,O-Glycosidase适用于释放附着于Ser / Thr的Core 1和Core 3 O-连接的二糖核心。如果底物中确定含有O-糖链,请确保同时使用Neuraminidase,以释放末端的唾液酸修饰基团。同时由于空间位阻效应(蛋白质的二级结构和三级结构)可以阻碍内切糖苷酶到达其底物作用位点,在去糖基化之前进行变性,同时按实验操作加入NP-40溶液有助于O-连聚糖有效的释放。如果不想变性处理,则考虑添加更多的酶或延长孵育时间。


在天然条件下释放糖蛋白的糖链,需要使用多少Rhinogen® O-Glycosidase?

当蛋白质不变性时,O-Glycosidase因为空间位阻效应可能难以到达糖链的切割位点(因为二级和三级蛋白质结构)。添加更多的酶量及延长反应时间可能有助于糖链释放效率的提高,但对于不同的糖蛋白样品,去糖基化活性高度依赖于反应条件,建议进行适当优化或根据经验确定最优的操作方法。


是否可以同时使用PNGase F、O-Glycosidase及α2-3,6,8,9 Neuraminidase?

是的。Rhinogen® PNGase F及O-Glycosidase采用相同的缓冲液及反应条件,而α2-3,6,8,9 Neuraminidase具有非常宽pH适用范围(pH4.5-8.5),在PNGase F及O-Glycosidase反应体系中具有较好的活性,三者可以同时使用。

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