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    您现在的位置:首页产品 糖苷酶系列 α-N-乙酰半乳糖苷酶
    α-N-乙酰半乳糖苷酶


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    3. 价格
    QPF-018-A
    2,000U/30μl
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    产品概述

    背景:

           在生产O-糖基化生物药物的过程中,由于核心GalNAc残基的不完全加工,可能会出现Tn抗原(GalNAc以α连接的方式链接在丝氨酸/苏氨酸上),有研究指出,Tn抗原可参与C型凝集素巨噬细胞半乳糖凝集素(MGL)结合,且MGL在树突细胞和巨噬细胞中表达,因此Tn抗原与MGL的链接可能引起免疫抑制,帮助肿瘤实现免疫逃逸。

           α-N-乙酰半乳糖苷酶是一种高度特异性的外糖苷酶,可有效水解与糖蛋白(Tn抗原)中丝氨酸或苏氨酸残基连接的α-N-乙酰半乳糖胺(GalNAc),该酶还对α1-3连接的末端GalNAcs显示活性。因此α-N-乙酰半乳糖苷酶可用于去除Tn抗原。

           α-N-乙酰半乳糖苷酶广泛分布于生物体内,参与糖缀合物的代谢。α-NAGA在天然条件下水解糖蛋白上的GalNAc。适用pH值范围6.0到7.6,不需要辅助因子或特殊缓冲体系。

    产品包装:

           Rhinogen® α-N-乙酰半乳糖苷酶包装规格如下:

            目录号
              规格
        浓度
         QPF-018-A
        2,000U/30μl
      67U/μl

    配套试剂:

           Rhinogen®α-N-乙酰半乳糖苷酶提供的试剂如下:

    试剂
    成分 规格
    10×Glyco缓冲液3
    200mM Tris, pH 6.8
    1ml


    产品来源:

           序列来源于Akkermansia muciniphila,重组表达于E. coli,理论分子量约52KD,C端带6×His标签。

    产品质量:

           SDS-PAGE分析,纯度≥95%;没有检测到污染的外切糖苷酶、糖苷内切酶及蛋白酶活性。

    产品特性:

           α-N-乙酰半乳糖苷酶(α-N-Acetylgalactosaminidase)是一种高度特异性的糖苷外切酶,可有效水解与糖蛋白中丝氨酸或苏氨酸残基连接的α-N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)(Tn抗原),该酶还对α 1-3连接的末端GalNAc显示活性。α-NAGA在天然条件下水解糖蛋白上的GalNAc。适用pH值范围6.0到7.6,不需要辅助因子或特殊缓冲体系。

    酶活定义:

           α-N-乙酰半乳糖苷酶能从4-Nitrophenyl N-acetyl-alpha -D-galactosaminide中裂解α-N-乙酰基半乳糖胺基,通过402nm检测释放PNP的量来定义酶活,在所述条件下(20mM Tris,pH6.8)每个活力单位每分钟能释放≥600pmol PNP。

    保藏条件:

           1. 采用冰袋运输, 长期储存请置于-20℃,重悬后2-8℃可保存1个月。
           2. 避免反复多次冻融和频繁的温度变化。

    应用:

           1.从糖肽及糖蛋白上释放完整的Tn抗原;
           2.对 O-糖基化生物药物进行 Tn 抗原表征;
           3.表征蛋白质是否糖基化及去糖基化;
           4.糖蛋白测序及分析;
           5.糖蛋白重组表达。

    特性:

           α-N-乙酰半乳糖苷酶在生理缓冲液和中性pH值中具有活性,使其与大多数样品兼容。此外,α-N-乙酰半乳糖苷酶的活性不依赖于可能损害LC-MS分析的任何辅助因子,例如BSA。根据糖蛋白底物的性质,孵育时间为2~18h。

    酶的特性

    α-N-乙酰半乳糖苷酶

    培养时间

    2-18h

    pH范围

    6.0-7.6

    MS兼容性

    兼容

    特殊缓冲液

    不需要

    辅助因子

    不需要

    添加剂或BSA












    实验准备:

           使用反应缓冲液中将糖蛋白底物调整至0.5-5.0mg/ml。

    糖蛋白消化:

           以2000U/支产品为例:
           1、使用100μl ddH2O重悬冻干粉至20U/μl;
           2、以1U α-N-乙酰半乳糖苷酶/1μg糖蛋白的比例添加α-N-乙酰半乳糖苷酶;
           3 、37℃孵育2-18h。
           注意:根据底物类型适当优化酶的浓度和孵育时间。

    注意事项:

           1. 避免反复冻融。
           2. 可适当分装以减少多次冻融带来的活性损失。
           3. 本产品仅供研究使用,不适用于人或动的物诊断及治疗用途。

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