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FabCOUPER protease
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QIP-009-A
1000U
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产品概述

背景:

FabCOUPER protease是一种来自Bdellovibrio bacteriovorus的丝氨酸蛋白酶,重组表达于E.coli,C端带6×His标签。可在铰链上方的单个位点特异性消化人IgG1,无需还原条件即可在两小时内产生完整的Fab和Fc片段。

包装规格:

Rhinogen® FabCOUPER protease包装规格如下:

        目录号
       规格
       QIP-009
     1000U

   产品储存于50 mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 1mM EDTA,pH7.6, 不添加防腐剂。

产品来源:

Rhinogen® FabCOUPER protease序列来自Bdellovibrio bacteriovorus,重组表达于E. coli,理论分子量约71.82KD。

产品特性:

Rhinogen® FabCOUPER protease是一种蛋白酶,可在铰链上方的单个位点特异性消化人IgG1,无需还原条件即可在两小时内产生完整的Fab和Fc片段。该酶对具有突变铰链区的抗体(例如LALA突变)具有活性。

酶活定义:

在50mMTris-HCl,150mM NaCl,10mM CaCl2,pH7.6条件下,37℃孵育2小时,1单位酶(1U)可消化1µg人IgG1的≥90%,通过SDS-PAGE确认。

储存条件:

1. 冷藏运输,到达时应储存在-70℃- -20℃条件下;

2. 由于FabCOUPER protease具有自降解活性,解冻后应保持低温并尽量在的同一天使用。同时可适当分装后冻存,避免多次冻融。

应用:

突变抗体和Fc融合蛋白消化及结构分。

使用建议:

实验准备:

1. 配制消化缓冲液:50mM Tris-HCl,150mM NaCl,pH7.6;

2. 使用前,请将Rhinogen® FabCOUPER protease从-20℃取出解冻,瞬离备用;

3. 将20×CaCl2从-20℃取出解冻,瞬离备用。

操作说明:

1. 使用消化缓冲液将人IgG1调整至0.5-5.0mg/ml;

2. 按1U FabCOUPER protease/1μg人IgG1的比例进行消化,确保最终反应体系中含有10mM CaCl2;

3. 以消化100μg人IgG1(2mg/ml)为例,将50μl人IgG1加入到EP管中,加入5μl FabCOUPER protease(20U/μl),加入5μl 20×CaCl2,加入40μl 消化缓冲液补足至100μl;

4. 轻柔混匀后瞬离,37℃条件下反应2小时。

注意:1)根据底物的不同,可能需要优化酶的用量和消化时间;

          2)反应可以线性放大或缩小;

          3)酶液可以适当稀释。



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常见问题

是否可以调整消化温度?

FabCOUPER protease的最适温度37℃,在22-30℃也显示出活性,在4℃或55℃检测不到明显活性。

该怎么选择消化缓冲液?

在pH值为7.0-8.5的TBS缓冲液中可获得最佳活性。其它类型的缓冲液可能需要实验验证。应避免含有磷酸盐的缓冲液,因为磷酸盐离子会与酶活性所需的钙离子一起形成不溶性磷酸钙盐。

酶的自降解是否会影响抗体消化?

FabCOUPER protease长时间孵育可导致蛋白酶完全降解,但自降解后的酶保持酶活性,延长孵育时间并不会产生非特异性水解。


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